敲除 GSDMD 后，caspase-1 照常激活、IL-1β 照常成熟，细胞却不焦亡了
导语：炎性小体激活 caspase-1 后细胞为什么会胀破死亡，这个问题在 2015 年之前没有答案——当时已知的 caspase-1 底物都解释不了焦亡。作者把筛选得到的 9 个候选蛋白逐一敲除，只有 1 个敲掉后细胞不死、IL-1β 不再释放，它就是 GSDMD。
阅读全文Cell Research · 2015
细胞死亡 / 炎症 / Western blot
从一条带，
读懂一个科研问题。
分享抗体实测与论文解读，把实验观察和研究证据放在一起。
抗体手记科研经验站14 种基因敲除小鼠逐一检验后，"线粒体凋亡激活 NLRP3"的流行模型没有一项成立
导语：2012 年前后，领域最流行的解释是：各种 NLRP3 刺激先引起线粒体凋亡，释放的线粒体成分再激活 NLRP3。但这个模型主要靠抑制剂实验和相关性观察，缺基因敲除检验。本文用 14 种基因敲除小鼠逐一检验，结果没有一项支持该模型；真正的新发现来自另一个分子——caspase-8 有一个不促死亡的功能。
阅读全文EMBO Reports · 2014
敲除 MLKL 挡不住 RIPK3 的促炎作用：RIPK3 经 caspase-8 激活 NLRP3
导语：一般认为 RIPK3 的促炎作用必须经过它的底物 MLKL，即通过坏死性凋亡间接激活炎性小体。本文在 MLKL 缺失的巨噬细胞中发现，LPS 加 IAP 抑制剂诱导的 caspase-1 切割和 IL-1β 分泌完全正常，而敲除 RIPK3 则显著缺陷——RIPK3 激活 NLRP3 可以不经过 MLKL。
阅读全文Nature Communications · 2015
被认为"免疫沉默"的线粒体凋亡也能激活 IL-1β：BAX/BAK 经 caspase-3/7 同时接通两条促炎通路
导语：线粒体凋亡通常被认为是"免疫沉默"的死亡方式——细胞不破膜，还会被吞噬细胞及时清除。本文发现，只要 BAX/BAK 通透线粒体外膜，凋亡的巨噬细胞就会释放 IL-1β，而同一时间 TNF 的分泌完全不受影响——沉默的只是凋亡的形态，不是它的炎症后果。
阅读全文Cell Reports · 2018
Western blot 上的 caspase-1 p20 条带恰恰是失活产物：自我剪切如何终止炎性小体活性
导语：教科书认为炎性小体激活后，caspase-1 自我剪切产生的 p20/p10 四聚体是有活性的形式。作者用活性探针在细胞里直接捕获有活性的 caspase-1，发现抓到的主要是 p33/p10，几乎抓不到 p20——p20/p10 不是活性产物，而是 caspase-1 失活后的残留。
阅读全文Journal of Experimental Medicine · 2018
gasdermin 打孔不只打细胞膜：GSDME 与 GSDMD 的 N 端也能通透线粒体
导语：作者在人白血病细胞中敲除 GSDME，本来预期只是焦亡减少，结果 caspase-3 的激活本身也变慢、变弱了。一个公认的 caspase-3 下游底物，反过来影响 caspase-3 的激活——本文证明原因是 GSDME-N 在细胞膜之外还打第二个靶：线粒体。
阅读全文Nature Communications · 2019
GSDMD 缺失时炎性小体并未失效：caspase-1 切割 Bid 启动凋亡
导语：Gsdmd 敲除的巨噬细胞在沙门菌感染后不发生典型的快速焦亡，但仍会死亡，只是死亡变慢、形态变成膜出泡的凋亡样，同时 caspase-3、-8、-9 都被激活。caspase-1 在失去 GSDMD 这个底物后做了什么，是本文要回答的问题。
阅读全文Nature Communications · 2019
28 种细胞因子组合中唯一能杀死巨噬细胞的一对：TNF-α + IFN-γ 如何引发 PANoptosis
导语：COVID-19 重症患者血清中同时升高的炎症因子有十几种，到底谁在致病一直没有答案。作者把 8 种候选因子两两组合处理巨噬细胞，28 种组合里只有 TNF-α 与 IFN-γ 这一组能杀死细胞；在小鼠中中和这两个因子，可显著降低细胞因子休克、脓毒症、HLH 和 SARS-CoV-2 感染模型的死亡。
阅读全文Cell · 2021
一个在进化中严格保守的切割位点，突变后小鼠却健康存活：RIPK3 切割管的不是坏死性凋亡
导语：教科书模型认为，caspase-8 靠切割 RIPK3 来阻止坏死性凋亡。本文作者把这个切割位点突变掉，小鼠却健康存活了 400 多天。这个位点真正的作用在另一条通路上：IAP 受抑时，它负反馈限制 NLRP3 炎性小体的激活强度。
阅读全文Cell Death & Differentiation · 2024
凋亡末期的破膜也是程序化的：caspase-3 切割 DFNA5 执行继发性坏死
导语：凋亡细胞若没被及时清除，最终会肿胀、破膜、漏出内容物，这种继发性坏死长期被当作被动的渗透压崩解。作者的出发点是：没有炎性 caspase 的双敲除巨噬细胞感染病毒后照样胀破——所有人源 caspase 逐一试过，只有 caspase-3 能切割 DFNA5，切开后的 N 端片段负责在细胞膜上打孔。
阅读全文Nature Communications · 2017
IFN-γ 单独处理不杀巨噬细胞，但预激后再给 TLR 配体就会：caspase-8 与线粒体凋亡如何接通感染与死亡
导语：IFN-γ 是经典的巨噬细胞激活因子，单独处理不杀伤细胞。本文发现，先用 IFN-γ 预激过夜、再加 LPS 等 TLR 配体，巨噬细胞会在 24 小时内死亡；换成 IFN-β 预激则完全不死。死亡的执行者是 caspase-8 和 BAX/BAK 线粒体凋亡通路，而 iNOS 产生的一氧化氮是这条通路能否启动的先决条件。
阅读全文Immunity · 2022
蛋白质组学筛选发现：caspase-1 炎性小体直接切割激活 caspase-7
导语：作者用蛋白质组学方法在巨噬细胞裂解液中筛 caspase-1 的底物，1022 个蛋白里只有 20 个在 Asp 后被切割——其中一个竟是"执行凋亡"的 caspase-7，且切割位点正是它的经典激活位点；更意外的是，筛出的切割事件有一半其实不像 caspase-1 干的，而像 caspase-7 干的。
阅读全文Molecular & Cellular Proteomics · 2008
坏死性凋亡的炎症不是"漏出来的"：活性 MLKL 在细胞破裂前经钾外流激活 NLRP3
导语：坏死性凋亡引发的炎症，教科书解释是细胞破裂后漏出的内容物（DAMP）刺激周围细胞。本文用渗透保护剂甘氨酸压住细胞裂解后发现：IL-1β 照样分泌——炎症是 MLKL 在细胞破裂前就激活 NLRP3 主动制造的，而不是破裂后被动漏出的。
阅读全文Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America · 2017
焦亡与凋亡的双向串扰：没有 GSDMD 时 caspase-1 走凋亡，凋亡 caspase 反过来失活 GSDMD
导语：同一个 caspase-1 激活，有 GSDMD 时细胞焦亡；敲除 GSDMD 后细胞改走凋亡。反过来，凋亡一旦启动，caspase-3/7 会在另一个位点（D87）把 GSDMD 切成无活性的 p43 片段，主动阻止焦亡。两条死亡通路的串扰是双向的，方向相反。
阅读全文Cell Chemical Biology · 2017
凋亡并非免疫静默：caspase-8 直接切割 GSDMD 致裂解，pannexin-1 驱动 NLRP3 激活
导语：凋亡长期被视为"免疫静默"的死亡方式，但本文发现 caspase-8 激活的外在凋亡会把 GSDMD 切成打孔的 p30 导致细胞裂解；而把 GSDMD 的 caspase-3 失活位点 D88 突变掉，小鼠健康出生，巨噬细胞凋亡时的死亡却增强 1.5 倍——凋亡平时不变成焦亡，靠的是 caspase-3 对 GSDMD 的失活切割。
阅读全文The EMBO Journal · 2019
效应 caspase 不只是执行者：caspase-3/-7 反馈放大上游凋亡信号
导语：在白血病细胞中同时敲除效应 caspase-3 和 -7，细胞对凋亡诱导剂的敏感性下降超过 4 个数量级——原因不仅是"行刑者"没了，而是上游启动 caspase-8、-9 的激活和线粒体通透化本身都需要下游效应 caspase 的反馈放大。
阅读全文Science Advances · 2019
MLKL 磷酸化后并不立刻裂膜：胞内转运决定坏死性凋亡的速度与阈值
导语：MLKL 被磷酸化后，细胞并不立刻死亡——HT29 细胞中这个时间差超过 3 小时。本文发现，这段时间用于把磷酸化的 MLKL 从坏死小体经高尔基、微管和肌动蛋白网络运到质膜上 1–2 个热点，热点处 MLKL 超过阈值才裂膜；膜损伤还会传给相邻细胞，使邻居的坏死加快约 25%。
阅读全文Nature Communications · 2020
caspase-1 被抑制后的备选死亡程序：caspase-8 改切 GSDME，放行 IL-1α 的"不完全焦亡"
导语：按教科书，敲掉 caspase-1/11 就该挡住炎性小体介导的焦亡——但本文发现， Nigericin 激活 NLRP3 后，野生型巨噬细胞 40 分钟开始死亡，caspase-1/11 双敲细胞 180 分钟后照死不误，只是换了一套执行机器；更反常的是，这种死亡放不出 IL-1β，却照常释放 IL-1α。
阅读全文iScience · 2020
GSDME 表达量决定结局：内源水平持续释放 IL-1β 而不裂解细胞，高表达才焦亡
导语：GSDMD 敲除的巨噬细胞激活炎性小体后，IL-1β 仍持续释放至少 5 小时，细胞膜却基本不破——执行者是内源水平的 GSDME。而同一个 GSDME 一旦过表达，就会造成完全的焦亡。表达量决定它走哪条路。
阅读全文Cell Reports · 2021
caspase-8 自我切割缺失：凋亡变弱、坏死性凋亡增强、淋巴细胞减少
导语：完全敲除 caspase-8 的小鼠在胚胎期死亡；本文只删除它自我切割位点中的一个氨基酸（E385），小鼠却能活到成年。但这一个氨基酸的缺失，足以把 TNF 诱导的凋亡切换成坏死性凋亡，并在 Ripk3 或 Mlkl 敲除背景下造成严重的淋巴细胞减少。
阅读全文Cell Death & Differentiation · 2022
XIAP 缺陷中凋亡与焦亡机器互为冗余：只有联合删除才能阻断死亡和 IL-1β 释放
导语：敲除 7 个死亡执行分子（caspase-1、-3、-7、-11、-12、BID、MLKL）的巨噬细胞，在 XIAP 抑制剂面前照样死亡、效率不输野生型——只有再删掉 GSDMD 才完全保护。本文由此证明 caspase-8 下游的凋亡和焦亡机器互为冗余。
阅读全文The EMBO Journal · 2023
GSDMD 先打穿线粒体双膜、再打穿细胞膜：线粒体损伤加速并放大焦亡
导语：焦亡中，GSDMD 在细胞膜上打孔之前，已经先打穿了线粒体的外膜和内膜。本文发现这种线粒体损伤不是死亡的副产品：敲除心磷脂合成酶 CRLS1 或把心磷脂运到线粒体外膜的 PLSCR3，焦亡和 IL-1β 释放都被显著抑制。
阅读全文Immunity · 2023
FROM THE BENCH
抗体实测15
原图、实验条件与使用观察。
搜索准备中…
Caspase-1
Proteintech · 武汉三鹰 / 22915-1-AP
早期条带很清楚；这次长曝光能看到 p10，其他剪切条带差异不大。
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Caspase-1 p20
ABclonal / A23429
用了约三年，p20 依然比较好检测；抑制剂组还出现了有意思的中间条带。
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GSDMD NT
ABclonal / A24059
p30 NT 条带很明显，加入抑制剂后的减弱也很直观。
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GSDME
ABclonal / A28230
全长条带明显减少，p35 NT 很清楚，剪切前后的变化一眼能看出来。
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GSDME NT
ABclonal / A26197
新旧货号都用过，整体体验不错；这次 p35 和约 13 kDa 条带的变化都很明显。
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cIAP1
ABclonal / A19688
用了一年多，背景干净；在几种细胞死亡模型里都能看到 cIAP1 下降。
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XIAP
ABclonal / A20846
背景较干净；全长逐渐减少，约 30 kDa 的条带逐渐增强。
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Caspase-3
碧云天 / AF5132
目标条带和变化能看到，但杂带较多；p17 在 120 min 时反而没有 60 min 明显。
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Cleaved-Caspase-3 p12
ABclonal / A28349
p12 位置合适、刺激后增加明显，加入抑制剂后减少或消失。
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Caspase-7
Proteintech · 武汉三鹰 / 27155-1-AP
近期杂带比以前多，但全长减少和低分子量条带变化仍能看出来。
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Caspase-9
ABclonal / A18676
全长和 p10 能同时检测；p10 偏浅，长曝光更清楚。
p10 需长曝光阅读全文 ↗
GSDMD
CST · Cell Signaling Technology / #39754
用了约三年，一直很喜欢；p30 和 p43 两种剪切变化都能看得很清楚。
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BAK 双抗体对照
碧云天 / ABclonal / AF1591 / A23523
两支抗体的目标条带都清楚、背景干净；2 h 内总 BAK 没有明显增加。
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BCL2
碧云天 / AG1225
用了约三年，目标条带依然清楚、背景干净；这组实验中 BCL2 基本稳定。
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PUMA
碧云天 / AF1204
用了约三年，背景依然干净；这组实验中 PUMA 随刺激时间延长逐渐下降。
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