细胞焦亡 · 抗体测评
GSDME
ABclonal · A28230
全长条带明显减少，p35 NT 很清楚，剪切前后的变化一眼能看出来。
01实验图片
02本次观察
这次的效果很满意
这支抗体的效果肉眼可见地好。凋亡刺激后的泳道 7、10 能看到非常明显的约 35 kDa NT 条带，低分子量区域的信号很突出。
全长和 NT 放在一起看
随着 p35 条带出现，全长 GSDME 条带明显减少，几乎看不到了。全长减少和 NT 增加同时呈现，让这组剪切变化比较容易读出来。
03蛋白背景
GSDME 又称 DFNA5，全长通常约为 55 kDa，是连接凋亡信号与细胞膜裂解的 gasdermin 家族蛋白。Caspase-3 切割其连接区后，释放约 30–35 kDa 的 N 端片段；该片段可在细胞膜上成孔，使表达 GSDME 的细胞出现焦亡样裂解。WB 中常关注全长条带的减少与 N 端条带的增加。N 端的实际迁移位置、信号强弱及出现时间，会受到细胞类型、处理条件和抗体识别区段的影响。
04本次实测条件
- 样本
- 人 THP-1 单核细胞
- 应用
- Western blot（WB）
- 一抗稀释
- 1:3000（本次实测）
- 凝胶
- 4–20% 梯度胶
- 电泳
- 200 V，45 min
- 转膜
- 320 mA，30 min
- 膜
- 0.2 μm NC 膜
- 封闭
- 不封闭
- 二抗
- 1:5000，1 h
- 上样量
- 未记录
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