细胞焦亡 · 抗体测评
Caspase-1 p20
ABclonal · A23429
用了约三年，p20 依然比较好检测；抑制剂组还出现了有意思的中间条带。
01实验图片
泳道分组
- 泳道 1、2、8、9、11、12
- 未注明
- 泳道 3、4
- 刺激组（药物未具名）
- 泳道 5、6
- 加入抑制剂（未具名）
- 泳道 7、10
- 凋亡刺激（药物未具名）
02本次观察
用了约三年，p20 仍然好跑
这支抗体买来约 3 年了，我个人感觉 p20 还是比较好跑的。刺激组的泳道 3、4 与对照组差异明显，低分子量的 p20 条带比较突出。
抑制剂组：30–40 kDa 的条带
加入抑制剂后，泳道 5、6 在 30–40 kDa 之间出现了明显条带。从位置来看，可能是 Caspase-1 加工过程中积累的 p33 类中间体，这一点很有意思。
凋亡刺激后出现多条带
凋亡刺激组的泳道 7、10 能看到多个不同分子量的条带。除了常关注的 p20，这支抗体还能呈现比较丰富的加工变化；这些额外条带也值得放在一起看。
03蛋白背景
Caspase-1 通常以前体 pro-Caspase-1（约 45–46 kDa）存在。炎症小体组装后，前体被招募并发生二聚化，随后自切割形成具有活性的 p33/p10。进一步切割去除 CARD 结构域后，可形成 p20/p10 并从炎症小体释放；在细胞内，这一过程可使活性随之下降。Caspase-1 还参与 IL-1β、IL-18 成熟和 GSDMD 剪切。因此，WB 中可能看到全长 p45/46 及 p33、p20、p10 等片段，具体条带取决于抗体表位、细胞类型和取样时间。
04本次实测条件
- 样本
- 人 THP-1 单核细胞
- 应用
- Western blot（WB）
- 一抗稀释
- 1:3000（本次实测）
- 凝胶
- 4–20% 梯度胶
- 电泳
- 200 V，45 min
- 转膜
- 320 mA，30 min
- 膜
- 0.2 μm NC 膜
- 封闭
- 不封闭
- 二抗
- 1:5000，1 h
- 上样量
- 未记录
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