细胞焦亡 · 抗体测评
Caspase-1
Proteintech · 武汉三鹰 · 22915-1-AP
早期条带很清楚；这次长曝光能看到 p10，其他剪切条带差异不大。
01实验图片
02本次观察
用了约三年的感受
这支抗体我已经买了约 3 年。刚买回来时效果很好，pro-Caspase-1 和多个剪切条带都比较清晰；和早期结果相比，这次检测的表现有所变化。
短曝光：前体减少，疑似 p43
这次短曝光下，pro-Caspase-1 条带减弱，泳道 7、10 在 40–55 kDa 之间能看到明显条带，疑似 p43。这个分子量区域的变化比低分子量条带更容易看出来。
长曝光：p10 能看见
延长曝光后，泳道 3–6 的 p10 条带可以看到。不过，其他剪切条带在各组之间的差异不太明显，这次没有早期使用时那么清楚。
03蛋白背景
Caspase-1 通常以前体 pro-Caspase-1（约 45–46 kDa）存在。炎症小体组装后，前体被招募并发生二聚化，随后自切割形成具有活性的 p33/p10。进一步切割去除 CARD 结构域后，可形成 p20/p10 并从炎症小体释放；在细胞内，这一过程可使活性随之下降。Caspase-1 还参与 IL-1β、IL-18 成熟和 GSDMD 剪切。因此，WB 中可能看到全长 p45/46 及 p33、p20、p10 等片段，具体条带取决于抗体表位、细胞类型和取样时间。
04本次实测条件
- 样本
- 人 THP-1 单核细胞
- 应用
- Western blot（WB）
- 一抗稀释
- 1:3000（本次实测）
- 凝胶
- 4–20% 梯度胶
- 电泳
- 200 V，45 min
- 转膜
- 320 mA，30 min
- 膜
- 0.2 μm NC 膜
- 封闭
- 不封闭
- 二抗
- 1:5000，1 h
- 上样量
- 未记录
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