细胞焦亡 · 抗体测评
GSDMD NT
ABclonal · A24059
p30 NT 条带很明显，加入抑制剂后的减弱也很直观。
01实验图片
泳道分组
- 泳道 1、2、7、8、9、10、11、12
- 未注明
- 泳道 3、4
- p30 NT 条带明显，具体处理未记录
- 泳道 5、6
- 加入抑制剂（未具名）
02本次观察
p30 NT 的表现很直观
这支抗体这次的效果很好。泳道 3、4 在约 30–31 kDa 的位置出现很明显的 GSDMD p30 NT 条带，目标信号比较容易辨认。
加抑制剂后明显减弱
加入抑制剂后，泳道 5、6 的 p30 NT 条带明显减弱。把这几条泳道放在一起看，处理前后的差别很清楚，是这次使用中让我比较满意的一点。
03蛋白背景
GSDMD 是细胞焦亡的执行蛋白，全长通常约为 53–55 kDa。炎性 caspase 切割后，释放约 30–31 kDa 的 N 端片段；N 端聚集并在细胞膜上成孔，促使细胞内容物释放。Caspase-3/7 也可在另一位点切割 GSDMD，产生约 43 kDa 的失活片段。因此，WB 中的 p30/31 与 p43 对应不同的加工方式。检测全长、N 端或特定剪切位点的抗体，呈现的条带组合也会不同。
04本次实测条件
- 样本
- 人 THP-1 单核细胞
- 应用
- Western blot（WB）
- 一抗稀释
- 1:3000（本次实测）
- 凝胶
- 4–20% 梯度胶
- 电泳
- 200 V，40 min
- 转膜
- 320 mA，30 min
- 膜
- 0.2 μm NC 膜
- 封闭
- 不封闭
- 二抗
- 1:5000，1 h
- 上样量
- 未记录
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