细胞凋亡 · 抗体测评
Cleaved-Caspase-3 p12
ABclonal · A28349
p12 位置合适、刺激后增加明显，加入抑制剂后减少或消失。
01实验图片
泳道分组
- 泳道 1、2、3、6、9、11、12
- 未注明
- 泳道 4
- LPS + Nigericin
- 泳道 5
- LPS + Nigericin + 抑制剂（未具名）
- 泳道 7、10
- 凋亡刺激（药物未具名）
- 泳道 8
- 加入抑制剂后，具体组合未记录
02本次观察
p12 的表现不错
这支 p12 抗体的表现让我比较满意。条带位置符合预期，凋亡刺激后的泳道 7、10 能看到明显的 p12 增加；泳道 8 加入抑制剂后，信号明显减少，甚至消失。
LPS + Nigericin 下也能看到少量 p12
除了凋亡刺激组，LPS + Nigericin 处理的泳道 4 也能看到少量 p12。对应加入抑制剂的泳道 5 中，这条信号消失了；把两组放在一起看，这个变化挺有意思。
03蛋白背景
Caspase-3 是凋亡过程中的执行酶，通常以约 32 kDa 的前体形式存在。上游 Caspase-8 或 Caspase-9 促使其加工，形成 p12 小亚基和 p19 大亚基；大亚基进一步成熟为 p17。活化后的 Caspase-3 可切割 PARP、GSDME 等底物。WB 中常关注全长与 p19/p17、p12 的变化；这些片段来自蛋白的不同区段，识别大亚基和识别 p12 的抗体往往呈现不同的条带组合。
04本次实测条件
- 样本
- 人 THP-1 单核细胞
- 应用
- Western blot（WB）
- 一抗稀释
- 1:3000（本次实测）
- 凝胶
- 4–20% 梯度胶
- 电泳
- 200 V，40 min
- 转膜
- 320 mA，30 min
- 膜
- 0.2 μm NC 膜
- 封闭
- 不封闭
- 二抗
- 1:5000，1 h
- 上样量
- 未记录
留言与讨论
无需注册，昵称可留空