细胞凋亡 · 抗体测评
Caspase-3
碧云天 · AF5132
目标条带和变化能看到，但杂带较多；p17 在 120 min 时反而没有 60 min 明显。
01实验图片
02本次观察
整体用下来的感受
这支抗体给我的感觉是价格比较亲民，目标条带能看到，变化趋势也基本符合预期。不过杂带比较多，剪切条带不算特别突出，读图时需要多留意。
12 孔胶：疑似 p17 和 p19
在 4–20% 梯度胶中，凋亡刺激后的泳道 7–12，全长 pro-Caspase-3 明显减少。泳道 10、11 在约 13–20 kDa 之间能看到两条较明显的条带，结合位置和变化，疑似 p17 和 p19。
6 孔胶：刺激并非越久越好
在 4–12% 胶的时间梯度里，30、60 min 的约 17 kDa 条带逐渐增加，60 min 时全长已明显减少。到 120 min，全长基本消失，但 p17 反而没有 60 min 那么明显。至少在这组条件下，延长刺激时间并没有让剪切条带更好看。
03蛋白背景
Caspase-3 是凋亡过程中的执行酶，通常以约 32 kDa 的前体形式存在。上游 Caspase-8 或 Caspase-9 促使其加工，形成 p12 小亚基和 p19 大亚基；大亚基进一步成熟为 p17。活化后的 Caspase-3 可切割 PARP、GSDME 等底物。WB 中常关注全长与 p19/p17、p12 的变化；这些片段来自蛋白的不同区段，识别大亚基和识别 p12 的抗体往往呈现不同的条带组合。
04本次实测条件
- 样本
- 人 THP-1 单核细胞
- 应用
- Western blot（WB）
- 一抗稀释
- 1:3000（本次实测）
- 凝胶
- 4–12% / 4–20% 梯度胶
- 电泳
- 200 V，40 min
- 转膜
- 320 mA，30 min
- 膜
- 0.2 μm NC 膜
- 封闭
- 不封闭
- 二抗
- 1:5000，1 h
- 上样量
- 未记录
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