细胞凋亡 · 抗体测评
Caspase-9
ABclonal · A18676
全长和 p10 能同时检测；p10 偏浅，长曝光更清楚。
01实验图片
02本次观察
这次的使用感受
之前我用过 CST 和碧云天的 Caspase-9 抗体，在自己的实验中效果比较一般。这支是最近新买的，最让我满意的是全长 Caspase-9 和剪切体 p10 可以同时检测，虽然还有少量杂带，但时间梯度的变化比较清楚。
60–120 min 的变化
到 60 min 时，p10 开始明显增加，全长 Caspase-9 逐渐减少；到 120 min，全长条带基本完全消失，p10 进一步增加。这组结果里，全长减少和 p10 增加能够对应起来，是我觉得这支抗体比较实用的一点。
p10 需要长曝光
p10 的条带确实偏浅，要长曝光才看得清楚。所以这支抗体虽然能兼顾全长和 p10，实际看片时仍要注意曝光条件，不能只看短曝光就判断 p10 有没有变化。
03蛋白背景
Caspase-9 是线粒体凋亡通路的启动酶，前体约为 46 kDa。细胞色素 c 释放后促进 APAF1 凋亡小体组装，招募并活化 Caspase-9，再激活下游 Caspase-3、Caspase-7。人 Caspase-9 自切割可产生 p35/p12；Caspase-3 的反馈切割还可形成 p37/p10 或 p35/p10。因此，WB 中可能同时出现全长、大亚基和 p10/p12 小亚基，不同切割位点、抗体表位及取样时间会影响条带组合。
04本次实测条件
- 样本
- 人 THP-1 单核细胞
- 应用
- Western blot（WB）
- 一抗稀释
- 1:3000（本次实测）
- 凝胶
- 4–12% 梯度胶
- 电泳
- 200 V，40 min
- 转膜
- 320 mA，30 min
- 膜
- 0.2 μm NC 膜
- 封闭
- 不封闭
- 二抗
- 1:5000，1 h
- 上样量
- 未记录
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