细胞焦亡 · 抗体测评
GSDME NT
ABclonal · A26197
新旧货号都用过，整体体验不错；这次 p35 和约 13 kDa 条带的变化都很明显。
01实验图片
泳道分组
- 泳道 1、2、3、4、5、6
- 未注明
- 泳道 7、10
- 刺激组（药物未具名）
- 泳道 8、9、11、12
- 刺激 + 抑制剂（均未具名）
02本次观察
新旧货号的使用感受
这支抗体的新旧货号我都用过，整体效果都不错。手里的旧货号买来约 3 年，再用时条带依然比较清晰；这次展示的测评用的是新货号。
刺激后：p35 和一条小分子量条带
刺激后的泳道 7、10 出现明显的约 35 kDa 条带，大小符合 GSDME-NT 的预期。同时，约 13 kDa 附近也有一条比较突出的信号，是这次测评中很有意思的现象。
抑制剂处理后的变化
加入抑制剂后，泳道 8、9、11、12 中，约 35 kDa 和 13 kDa 两处的信号都明显减弱。这里把 13 kDa 作为额外的小分子量条带来观察，它和 p35 在这组处理中的变化方向一致。
03蛋白背景
GSDME 又称 DFNA5，全长通常约为 55 kDa，是连接凋亡信号与细胞膜裂解的 gasdermin 家族蛋白。Caspase-3 切割其连接区后，释放约 30–35 kDa 的 N 端片段；该片段可在细胞膜上成孔，使表达 GSDME 的细胞出现焦亡样裂解。WB 中常关注全长条带的减少与 N 端条带的增加。N 端的实际迁移位置、信号强弱及出现时间，会受到细胞类型、处理条件和抗体识别区段的影响。
04本次实测条件
- 样本
- 人 THP-1 单核细胞
- 应用
- Western blot（WB）
- 一抗稀释
- 1:3000（本次实测）
- 凝胶
- 4–20% 梯度胶
- 电泳
- 200 V，45 min
- 转膜
- 320 mA，30 min
- 膜
- 0.2 μm NC 膜
- 封闭
- 不封闭
- 二抗
- 1:5000，1 h
- 上样量
- 未记录
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