细胞凋亡 · 抗体测评
PUMA
碧云天 · AF1204
用了约三年，背景依然干净；这组实验中 PUMA 随刺激时间延长逐渐下降。
01实验图片
02本次观察
老抗体的表现依然很好
这支 PUMA 抗体我用了约 3 年，效果依然很满意。背景干净，条带的变化趋势明显，读起来比较直观。
这次看到的是逐渐下降
随着刺激时间延长，PUMA 蛋白水平逐渐下降。到 2 h 时，配套检测的 Caspase-3、GSDME 已出现明显活化和剪切，而 PUMA 没有增加，反而继续减少。这是这组实验里比较值得留意的变化。
03蛋白背景
PUMA 由 BBC3 编码，是 BCL2 家族中的 BH3-only 促凋亡蛋白，常见 WB 条带约为 23 kDa。它可响应 p53 相关或其他应激信号，通过结合 BCL2、BCL-XL 等抗凋亡成员，促进线粒体通路的启动和细胞色素 c 释放。PUMA 的表达和周转会随细胞类型、刺激方式及时间变化，因此不同模型中可能看到上升、稳定或下降的趋势。常规 WB 主要用于观察其总蛋白水平。
04本次实测条件
- 样本
- 人 THP-1 单核细胞
- 应用
- Western blot（WB）
- 一抗稀释
- 1:3000（本次实测）
- 凝胶
- 4–12% 胶
- 电泳
- 200 V，35 min
- 转膜
- 300 mA，30 min
- 膜
- 0.2 μm NC 膜
- 封闭
- 1% PVP，1 h
- 二抗
- 1:8000，1 h
- 上样量
- 未记录
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