细胞凋亡 · 抗体测评
BAK 双抗体对照
碧云天 / ABclonal · AF1591 / A23523
两支抗体的目标条带都清楚、背景干净；2 h 内总 BAK 没有明显增加。
01实验图片
02本次观察
两支抗体都比较满意
这次一起比较了碧云天 AF1591 和 ABclonal A23523。两支抗体的目标条带都很清楚，背景干净，基本没有明显杂带。图中的 BAK BYT 对应碧云天，BAK AB 对应 ABclonal。
总 BAK 没有随凋亡明显升高
到 2 h 时，配套检测的 Caspase-3、GSDME 已经出现明显活化和剪切，但 BAK 总蛋白没有明显增加。这也是这组结果值得留意的地方：下游变化很明显，总 BAK 仍然比较稳定。
03蛋白背景
BAK 是 BCL2 家族的促凋亡效应蛋白，主要位于线粒体外膜，理论分子量约为 23 kDa，WB 常见于约 23–25 kDa。受到死亡信号刺激后，BAK 可发生构象改变和寡聚化，促进线粒体外膜通透化、细胞色素 c 释放，并推动下游 caspase 级联。它的功能变化主要涉及构象和聚集状态，因此在常规变性 WB 中，即使凋亡信号已出现，总 BAK 条带也可能保持相对稳定。
04本次实测条件
- 样本
- 人 THP-1 单核细胞
- 应用
- Western blot（WB）
- 一抗稀释
- 1:3000（本次实测）
- 凝胶
- 4–12% 胶
- 电泳
- 200 V，35 min
- 转膜
- 300 mA，30 min
- 膜
- 0.2 μm NC 膜
- 封闭
- 1% PVP，1 h
- 二抗
- 1:8000，1 h
- 上样量
- 未记录
留言与讨论
无需注册，昵称可留空