细胞焦亡 · 抗体测评
GSDMD
CST · Cell Signaling Technology · #39754
用了约三年，一直很喜欢；p30 和 p43 两种剪切变化都能看得很清楚。
01实验图片
泳道分组
- 泳道 1、2
- 未注明
- 泳道 3、4
- LPS + Nigericin
- 泳道 5、6
- LPS + Nigericin + 抑制剂（未具名）
- 泳道 7、10
- 凋亡刺激（药物未具名）
- 泳道 8、9、11、12
- 凋亡刺激 + 抑制剂（均未具名）
02本次观察
一直在用的一支抗体
这支 GSDMD 抗体买来约 3 年，我一直在用。最喜欢的一点是，焦亡和凋亡相关的剪切都能检测到，同一支抗体就能看到不同的变化。
焦亡条件下的 p30
LPS + Nigericin 处理后，泳道 3、4 的 GSDMD p30 NT 条带非常明显。加入抑制剂后，泳道 5、6 的 p30 信号明显减弱。
凋亡条件下的 p43
凋亡刺激后的泳道 7、10，全长 GSDMD 几乎看不到，p43 条带很清晰。加入抑制剂后，泳道 8、9、11、12 的 p43 减少、全长增加，前后变化很直观。
03蛋白背景
GSDMD 是细胞焦亡的执行蛋白，全长通常约为 53–55 kDa。炎性 caspase 切割后，释放约 30–31 kDa 的 N 端片段；N 端聚集并在细胞膜上成孔，促使细胞内容物释放。Caspase-3/7 也可在另一位点切割 GSDMD，产生约 43 kDa 的失活片段。因此，WB 中的 p30/31 与 p43 对应不同的加工方式。检测全长、N 端或特定剪切位点的抗体，呈现的条带组合也会不同。
04本次实测条件
- 样本
- 人 THP-1 单核细胞
- 应用
- Western blot（WB）
- 一抗稀释
- 1:3000（本次实测）
- 凝胶
- 4–20% 梯度胶
- 电泳
- 200 V，40 min
- 转膜
- 320 mA，30 min
- 膜
- 0.2 μm NC 膜
- 封闭
- 不封闭
- 二抗
- 1:5000，1 h
- 上样量
- 未记录
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