1
00:00:00,004 --> 00:00:04,649
点击“打开项目包”，打开已保存的 Figure 项目。

2
00:00:04,649 --> 00:00:13,176
这次只定量下半张膜 GSDMD 的 30 kDa 信号，用上半张膜 HSP90 作为内参。

3
00:00:13,176 --> 00:00:16,791
回到 GSDMD 发光原图。

4
00:00:16,791 --> 00:00:21,984
横向框住下方 30 kDa 信号，覆盖六道样本。

5
00:00:21,984 --> 00:00:27,205
调整选框上下边沿，只保留这一排信号和少量背景。

6
00:00:27,205 --> 00:00:32,186
把这条裁剪命名为 GSDMD 30 kDa。

7
00:00:32,186 --> 00:00:34,919
点击“保存到条带库”。

8
00:00:34,919 --> 00:00:40,448
新的条带只包含 30 kDa，原来的双信号裁剪继续保留。

9
00:00:40,448 --> 00:00:44,638
进入“Figure 拼图”，新建一张定量 Figure。

10
00:00:44,638 --> 00:00:51,814
给这张 Figure 命名为 GSDMD 30 kDa 与 HSP90 定量。

11
00:00:51,814 --> 00:00:53,983
泳道数设为六。

12
00:00:53,983 --> 00:00:58,600
从条带库拖入 GSDMD 30 kDa。

13
00:00:58,600 --> 00:01:02,261
再拖入同一张膜的 HSP90。

14
00:01:02,261 --> 00:01:08,753
按同一样本顺序填写六道名称：三个 Control，三个 Drug。

15
00:01:08,753 --> 00:01:12,534
目标和内参的同一列，对应同一个样本。

16
00:01:12,534 --> 00:01:15,017
打开“常用蛋白分子量”。

17
00:01:15,017 --> 00:01:18,418
蛋白名称填写 HSP90。

18
00:01:18,418 --> 00:01:20,742
分子量填写 90。

19
00:01:20,742 --> 00:01:22,629
勾选“内参”。

20
00:01:22,629 --> 00:01:24,842
点击“保存记录”。

21
00:01:24,842 --> 00:01:27,333
点击“条带灰度定量”。

22
00:01:27,333 --> 00:01:29,743
选择“以内参归一化”。

23
00:01:29,743 --> 00:01:35,981
给 GSDMD 30 kDa 选择 HSP90 作为内参。

24
00:01:35,981 --> 00:01:40,936
这两条带来自同膜的上下半张膜，六道样本顺序一致。

25
00:01:40,936 --> 00:01:44,214
条带明暗选择“浅底深色条带”。

26
00:01:44,214 --> 00:01:51,345
每道选框就是计算区域。软件在框内估计背景，再累加扣除背景后的信号。

27
00:01:51,345 --> 00:01:53,768
先关闭等宽锁定。

28
00:01:53,768 --> 00:01:57,217
拖动中间分界，避开相邻泳道。

29
00:01:57,217 --> 00:02:00,695
需要统一宽度时，再勾选等宽。

30
00:02:00,695 --> 00:02:05,372
上下移动单道选框，让它对准 30 kDa 信号。

31
00:02:05,372 --> 00:02:09,291
拖动蓝色边沿，调整这道选框的高度。

32
00:02:09,291 --> 00:02:12,799
勾选等高，统一六道的选框高度。

33
00:02:12,799 --> 00:02:18,832
逐道检查信号和少量背景都在框内，避免混入上方 53 kDa。

34
00:02:18,832 --> 00:02:22,750
再查看 HSP90 的六道选框。

35
00:02:22,750 --> 00:02:25,085
勾选内参的等宽。

36
00:02:25,085 --> 00:02:27,595
再勾选内参的等高。

37
00:02:27,595 --> 00:02:33,005
内参的位置与目标不同，两组都要按相同样本顺序核对。

38
00:02:33,005 --> 00:02:36,874
点击 GSDMD 的“确认泳道选区”。

39
00:02:36,874 --> 00:02:41,283
再点击 HSP90 的“确认泳道选区”。

40
00:02:41,283 --> 00:02:47,148
点击“计算灰度比值”，读取原图像素并计算背景校正积分密度。

41
00:02:47,148 --> 00:02:52,745
计算后已显示结果表，六道的目标、内参和比值都列在这里。

42
00:02:52,745 --> 00:03:00,935
每道比值等于 GSDMD 30 kDa 的积分密度，除以对应 HSP90 的积分密度。

43
00:03:00,935 --> 00:03:08,003
检查六个样本名、分母和背景后再导出。这里还没有把对照组平均值设为一。

44
00:03:08,003 --> 00:03:12,466
点击“导出 Excel”，保存六道结果和选区记录。

45
00:03:12,466 --> 00:03:15,477
打开实际导出的表格。

46
00:03:15,477 --> 00:03:20,815
表格中的六道标签、积分密度和比值，与刚才的结果一致。

47
00:03:20,815 --> 00:03:22,625
返回软件。

48
00:03:22,625 --> 00:03:28,623
点击“备份整个项目”，把这次裁剪、选区和内参设置一起保存。

49
00:03:28,623 --> 00:03:34,833
下次打开这个项目，还可以核对原图和选框，再重新计算需要的结果。